Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему: Морфофункциональная характеристика многокамерного желудка овец в пренатальном онтогенезе
Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Морфофункциональная характеристика многокамерного желудка овец в пренатальном онтогенезе
На правах рукописи
Дилекова Ольга Владимировна
МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МНОГОКАМЕРНОГО ЖЕЛУДКА ОВЕЦ В ПРЕНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ
16.00.02 — патология, онкология и морфология животных
диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Работа выполнена на кафедре анатомии и патанатомии ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет»
Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент
Лапина Татьяна Ивановна
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор
Мещеряков Федор Александрович
Защита диссертации состоится « 22 » декабря 2005 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д. 220.062.02 при ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет» по адресу: 355017, г.Ставрополь, пер.Зоотехнический, 12.
кандидат медицинских наук, доцент Радцева Галина Львовна
Ведущая организация: ГНУ «Всероссийский Научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии»
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет».
Автореферат разослан « 22 » ноября 2005 г.
Ученый секретарь диссертационного совета
Актуальность темы. С интенсификацией животноводства в рацион жвачных животных из года в год вводят новые виды кормов, что вызывает необходимость глубокого изучения гистофизиологии органов пищеварения, а особенно многокамерного желудка при обычных условиях хозяйственного кормления, как эталон нормального его развития, который можно использовать в качестве контроля. В том числе необходимо знать закономерности индивидуального развития, представляющие собой цепь количественных и качественных изменений, тесным образом связанных с окружающей средой. Для этого необходимо всестороннее изучение взаимоотношений между окружающей средой и растущим животным организмом, т. е. знание «закона корреляции и координации».
Пищеварительный аппарат является тем органом, через который организм «строит себя из условий окружающей среды», так как органы пищеварения связаны с внешней средой — пищей. При изменении пищи, прежде всего, изменяется функция и строение пищеварительного тракта.
Из жвачных животных наиболее изучен крупный рогатый скот (М. Г. Коннов, 1944; Е. Т. Хруцкий, 1964; А. А. Туревский, 1964; П. В. Груздев, 1975; К. А. Васильев, 1991; JI. П. Тельцов, В. А. Столяров, И. В. Добрынин, 2000; С. К. Буткевич, А. Ф. Трофимов, А. А. Музыка, 2002; А. Е. Луценко, 2003; К. Hill, 1961; G. Godfrey, 1961; I. L. Arias, 1978; F. J. Perez-Barberia, I. J. Gordon, A. Illius, 2002). Гистофизиология желудка овец описана в единичных работах (К. Ш. Баймухамбетов, 1958; С. Н. Боголюбский, 1968; JI. В. Давлетова, 1978; Т. В. Демидова, 1981; Ф. А. Мещеряков, 1990; Р. М. Хацаева, 2002; D. Lubus, J. D. O'Shea, 1978).
Поэтому изучение морфофункциональных показателей желудка овец ставропольской породы пренатального онтогенеза при обычных условиях хозяйственного кормления имеет важное прикладное значение.
Цель исследования. Изучить морфофункциональную характеристику многокамерного желудка овец в пренатальном онтогенезе.
1. Проследить закономерности роста рубца, сетки, книжки и сычуга в период пренатального онтогенеза.
2. Изучить гистогенез и морфометрические параметры стенки пред-желудков и сычуга.
3. Описать топографию и динамику содержания углеводсодержа-щих биополимеров в стенке желудка в связи с формированием защитного барьера
4. Выявить закономерности закладки, развития железистого аппарата сычуга и проследить появлениелшижринных клеток.
Научная новизна работы. Впервые изучено развитие желудка и его камер у овец ставропольской породы в пренатальном онтогенезе.
Проведено комплексное морфометрическое изучение и выявлены темпы роста и соотношения обблочек в рубце, сетке, книжке и сычуге.
Прослежено появление эндокринных клеток сычуга. Описана критическая фаза в развитии стенки желудка и его оболочек.
Теоретическая и практическая значимость.
Настоящее исследование является теоретической базой для сравнительной возрастной морфологии животных. Результаты исследований могут быть использованы в учебном процессе сельскохозяйственных и биологических вузов. Полученные данные можно использовать в качестве контроля при заболеваниях органов пищейарения и обмена веществ.
Материалы исследований используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий в ФГОУ ВПО Ставропольском, Кубанском, Донском государственных аграрных университетах и в Карачаево-Черкесской технологической академии.
Апробация результатов научных исследований.
Основные положения диссертации доложены и обсуждены на XI итоговой межвузовской научной конференции молодых ученых и студентов (Ставрополь, 2003), Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора С Н. Никольского (Ставрополь, 2003), Международной научно-практической конференции «Актуальные аспекты экологической, сравнительно-видовой, возрастной и экспериментальной морфологии», посвященной 100-летию В. Я. Суетина (Улан-Удэ, 2004), II Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию факультета ветеринарной медицины СтГАУ (Ставрополь, 2004), Международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию Вятской государственной сельскохозяйственной академии (Киров, 2005), научно-практической конференции «Актуальные вопросы зоотехнической и ветеринарной науки и практики в АПК» (Ставрополь, 2005).
Основные результаты научных исследований вошли в отчеты по научно-исследовательской работе СтГАУ за 2002—2005 гг.
Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
— Морфофункциональная и возрастная характеристика многокамерного желудка плодов овец, в связи с цитогенезом и формированием в них морфологических структур.
— Критическая фаза развития роста и массы плодов с дифферен-цировкой стенки преджелудков и сычуга.
— Закладка и функциональная характеристика эндокринных клеток сычуга.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 147 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений и списка литературы. Работа иллюстрирована 59 рисунками. Список используемой литературы содержит 135 источников, в том числе 15 зарубежных.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований
Работа выполнена на кафедре анатомии и патанатомии ФГОУ ВПО Ставропольского государственного аграрного университета на плодах овец ставропольской породы, полученных из ФГУП племзавода «Советское Руно» Ипатовского района, Ставропольского края.
Всего использован материал от 30 животных разных периодов пре-натального онтогенеза: от 1,5-месячного до 5-месячного возраста.
Для изучения интенсивности роста желудка и его камер у плодов извлекали и взвешивали желудок без содержимого, а затем отдельно рубец, сетку, книжку и сычуг. На основании полученного абсолютного веса каждой камеры желудка вычисляли их относительный вес в процентах к общему весу желудка.
Для гистологических исследований кусочки рубца, сетки, книжки и сычуга фиксировали в 10% нейтральном формалине, жидкости Карнуа и 80% спирте. Заливку проб проводили в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином для изучения общей структуры исследуемых органов и морфометрических измерений, по Ван-Гизон для выявления соединительной ткани, по Маллори — на коллагеновые волокна, по Вейгерту — на эластические (Меркулов, 1969).
I Гистохимически материал исследовали на содержание нуклеиновых
кислот, общего белка, углеводов, липидов и эндокринных клеток.
Для выявления нуклеиновых кислот использовали реакцию Эй-нарсона с галлоцианин-хромовыми квасцами. Реакцию на общий белок проводили сулема-бромфеноловым синим (Э. Пирс, 1962). Гликоген и другие ШИК-положительные вещества и тканевые базофилы выявляли по методу А. Л. Шабадаша (1947). Для дифференциации гликогена от других ШИК-положительных компонентов срезы перед окраской подвергали обработке амилазой слюны в течение 20 мин при 37 °С (Б. Ромейс, 1954). Кислые углеводсодержащие биополимеры выявляли альциановым синим по Стидмену (Э. Пирс, 1962). Липиды
определяли при помощи окраски Суданом черным в парафиновых срезах по Мак-Манусу (Э. Пирс, 1962). Для выявления эндокринных клеток использовали способ Бильшевского-Гросс (С. С. Вайль, 1947).
Измерение толщины стенки желудка плодов, его оболочек и других гистологических структур проводили при помощи программы Морфо-Видео-Тест 4.0. С препаратов были сделаны фотографии цифровым фотоаппаратом «Olympus 2000».
Получено и подвергнуто анализу 600 гистологических препаратов. С них сделано более 200 микрофотографий (табл. 1).
Таблица I — Материал и методы исследований
BoipaCT плодов Препараты
№ и/п Методы исследований 1,5 мес. 3 мес 3,5 мес. 4 мес 4,5 мес. Sä «о Рубец ^ Книжка Сычуг Всего
I Расчет относительного роста камер желудка 5 5 5 5 5 5 - - - - 30
2 Гистологическое и морфомегрическое исследование стенки преджелудков и сычуга 100 НЮ 100 100 400
3 Гистохимическое исследование стенки преджелудков и сычуга 50 50 50 50 200
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Пренатальный онтогенез многокамерного желудка плодов овец ставропольской породы
В различные периоды пренатального онтогенеза рост желудка и его камер происходите неодинаковой интенсивностью (рис. 1).
В течение онтогенеза наибольшими темпами роста характеризуется рубец, сычуг растет медленнее. Поэтому в раннеплодном периоде масса от-
дельных камер, выраженная в процентах к общей массе желудка, заметно больше у рубца (38,66%), затем последовательно идут сычуг (22,98%), сетка (19,85%) и книжка (18,51%). До конца среднеплодного периода развития плодов (90 дней) рост рубца продолжается интенсивнее сычуга. Лишь начиная с 105 дня развития и до рождения, наибольшую интенсивность роста приобретает сычуг и оказывается сформированным для участия в молочном питании. Относительный вес рубца в позднеплодном периоде снижается до 19,82%, а темпы роста сетки и книжки относительно невелики и варьируют в течение периода от 8% до 13%.
Рисунок! - Относительный рост камер желудка у плодов
Гистологическая и гистохимическая характеристика стенки рубца плодов овец в пренатальном онтогенезе
В раннеплодный период развития (45 дней) у плода овцы стенка рубца представлена слизистой, подслизистой, мышечной и серозной оболочками.
Толщина всей стенки рубца в этот период составляет 0,29±0,01 мм, слизистой оболочки 0,09±0,003 мм, а мышечной 0,19±0,008 мм.
Слизистая оболочка представлена многорядньгм эпителием, который в некоторых местах начинает перестраиваться в многослойный, формируя шиповатый слой, состоящий из двух рядов клеток. Клетки базального и шиповатого слоев содержат гликоген в виде пылевидной зернистости. Локализация его при этом не одинакова.
Так как идет высокая митотическая активность в эпителиальном пласте слизистой оболочки, суммарное содержание нуклеиновых кислот составляет (+ + + +), цитоплазма базального и шиповатого слоя клеток содержит белок.
Мышечная оболочка состоит из циркулярного и продольного слоев. Циркулярный слой - внутренний, образован 3—4 пучками гладкомышеч-ных клеток. Продольный мышечный слой — наружный, состоит из 2—3 слоев гладкомышечных клеток.
Серозная оболочка состоит из соединительно-тканной основы, покрытой мезотелием.
В конце средпеплодного периода (90 дней) толщина стенки рубца увеличивается на 86%. При этом толщина мышечной оболочки возрастает на 48,4%, а слизистой на 105%. Следовательно, в раннеплодный и средне-плодный периоды развития стенки рубца наиболее интенсивным ростом характеризуется мышечная оболочка, составляя 52% от всей стенки.
Слизистая оболочка состоит из многослойного плоского неороговеваю-щего эпителия. В базальном слое продолжается митотическая активность клеток.
Содержание нуклеиновых кислот в клетках эпителия колеблется от (+ + + +) в базальном слое до (+ +) в верхних слоях. Общий белок располагается вокруг ядерной оболочки и по периферии клеток.
В толщу эпителиального пласта, прогибая базальную мембрану, из собственно-слизистого слоя внедряются соединительно-тканные сосочки листовидном и грибовидной формы. В верхушках сосочков проходят мелкие кровеносные сосуды. Высота соединительно-тканных сосочков составляет 0,095±0,008 мм, ширина сосочков 0,048±0,005 мм.
В мышечной оболочке циркулярный слой в два раза больше продольного. Под циркулярным мышечным слоем проходит межмышечное нервное сплетение и сеть крупных кровеносных сосудов.
В стснке рубца количество гликогена остается высоким. К концу среднеплодного периода нейтральные углеводсодержащие биополимеры локализованы в малом количестве в слизистой оболочке рубца (в цигоплазме шиповатого и плоского слоя клеток эпителия), но более богаты данными соединениями подслизистая основа и мышечная оболочка. Кислые углеводсодержащие биополимеры выявляются только в некоторых местах базальной мембраны. Липиды локализованы в оболочке клеток всей стенки рубца.
В начале по зднеплодного периода развития (105 дней) все оболочки и слои стенки рубца продолжают утолщаться, в результате чего общая толщина стенки увеличивается на 23%. При этом толщина мышечной оболочки падает на 30%, а слизистая увеличивается на 81,1% по сравнению со стенкой 90-дневного плода. Следовательно, если в 8
конце среднеплодного периода наиболее интенсивным ростом характеризуется мышечная оболочка, то в начале позднеплодного периода более интенсивно развивается слизистая, составляя 64,9% от толщины всей стенки.
Наряду с ростом имеющихся соединительно-тканных сосочков, образуются новые сосочки. Высота их равна 0,201 ±0,013 мм, ширина их составляет 0,04+0,007 мм. Наружная поверхность слизистой оболочки рубца между вершинами сосочков образует небольшие углубления, вследствие разъединения и уплотнения клеток шиповатого слоя.
В 120 дней развития плода толщина стенки рубца увеличивается на 24%. При этом толщина слизистой оболочки снижается на 2,7% и составляет 39,2% по сравнению с мышечной оболочкой, которая с возрастом увеличивается на 133% и соответствует 55%. На 135 день развития стенка рубца уменьшается на 34,5%, слизистая в этом возрасте продолжает идти на убыль и понижается на 25,5%, внутри стенки ее толщина составляет 44,8%, тогда как мышечная оболочка уменьшается на 54,5%, по сравнению с ее внутристеночным содержанием, равным 38,4%. Перед рождением плода стенка рубца опять уменьшается на 3,1%, но слизистая и мышечная оболочки, наоборот, возрастают на 4,5% и 7,7%, хотя внутри стенки процентное соотношение слизистой оболочки равно 42,7%, по сравнению с мышечной - 48,4%.
На протяжении позднеплодного периода развития и до рождения ста гка рубиа сначала активно утолщается, но затем толщина ее резко уменьшается, что можно связать с активным ростом и набиранием веса самого плода. Из процентных данных видно, что в 120 дней мышечная оболочка превалирует над слизистой, хотя через 15 дней развития (в 135 дней) и до рождения слизистая опять начинает свое утолщение, что можно связать с развитием соединительно-тканных сосочков.
В 120 дней развития высота сосочков равна 0,192+0,016 мм, а ширина 0,066+0,008 мм, но при этом сосочки продолжают развиваться. На 150 день развития сосочки в высоте немного падают (0,186±0,014 мм), хотя в ширину они активно разрастаются (0,77+0,003 мм), при этом развивающихся сосочков уже нет.
Из всего можно сделать вывод, что соединительно-тканные сосочки перед рождением начинают разрастаться в ширину, увеличивая свою всасывательную поверхность, которая им пригодится после рождения при переваривании грубых кормов. Для предупреждения преждевременной кератинизации сосочков слизистая оболочка активно разрастается, в ней увеличивается толщина эпителиального пласта, особенно шиповатого слоя, который вместе с плоским слоем одевает как бы «чехликом» сосочки до их середины.
Суммарное количество нуклеиновых кислот в эпителии (+ +) и повышается до (+ + + +), отмечается увеличение количества общего белка с наибольшим его содержанием в базальных клетках.
Содержание гликогена в эпителиальных клетках слизистой оболочки рубца в позднеплодный период уменьшается. Однако вплоть до рождения количество его остается значительным. В эпителии рубца 135 и 150-дневных плодов базальные клетки гликогена не содержат. Среди клеток шиповатого слоя встречаются клетки, заполненные гликогеном и лишенные его. Большинство их заполнено на 1/3 часть или содержат глыбки гликогена.
Различная локализация и вариации количества гликогена в клетках указывают на то, что эпителий рубца поздних плодов овец — это динамическое депо, в котором он синтезируется и расходуется для жизнедеятельности самого эпителия и общих нужд плода.
Формирование защитного слоя в эпителии рубца связано с накоплением в нем нейтральных и кислых углеводсодержащих биополимеров, что наиболее выражено в поверхностных слоях шиповатого и плоского слоев эпителия. В рубце 120-дневных плодов нейтральные углеводсодержащие биополимеры выявляются в 3—6 рядах шиповатого слоя преимущественно по ходу клеточных оболочек. В плоском слое эпителия цитоплазма полностью заполнена ими. В базальных клетках также обнаруживается небольшое количество нейтральных углеводсодержащих биополимеров. Богата ими и подслизистая основа, составляющая основу сосочка, и базальная мембрана. Кислые углеводсодержащие биополимеры выявляются только в плоском слое эпителиального пласта слизистой оболочки.
Таким образом, интенсивный рост рубца у плодов овец сопровождается рядом морфофункциональных дифференцировок. Для слизистой оболочки характерны формирование соединительно-тканных сосочков, максимальная толщина эпителиального пласта, депонирование гликогена, липидов, нейтральных и кислых углеводсодержащих биополимеров.
Гистологическая и гистохимическая характеристика стенки сетки плодов овец в пренатальном онтогенезе
В раннеплодный период развития плода (45 дней) в сетке сформированы: слизистая оболочка, подслизистая основа, мышечная и серозная оболочки. Толщина стенки сетки в этот период составляет 0,185+0,005 мм. Слизистая оболочка равна 0,094+0,0034 мм, а мышечная - 0,06±0,0033 мм.
Эпителий слизистой оболочки многослойный плоский неороговеваю-щий. В клетках базального слоя эпителия видны фигуры митоза.
Суммарное содержание нуклеиновых кислот в этот период (+ + + +). Общий белок содержится в ядрах и цитоплазме клеток базального слоя эпителия.
Эпителий слизистой оболочки сетки в раннеплодный период развития богат гликогеном, который располагается по всем клеткам в виде крупных глыбок. Нейтральные и кислые углеводсодержащие биополимеры в эпителии слизистой оболочки у плодов на 45 день развития не выявляются.
Липиды содержатся в цитоплазме клеток в виде крупных капель.
Мышечная оболочка состоит из двух слоев. Первый слой циркулярный, внутренний, второй слой продольный, наружный.
В конце среднеплодного периода (90 дней) стенка сетки увеличилась на 71,4%. При этом толщина слизистой оболочки возросла на 77,7%, а мышечной — на 266,6%. Следовательно, в среднеплодный период развития стенки сетки наиболее интенсивным ростом характеризуется мышечная оболочка, составляя 69,4% от всей стенки.
Нуклеиновые кислоты дают реакцию (+ +) в базальном слое, в остальных слоях — (+), общий белок содержится перинуклеарно.
Гликоген в большом количестве выявляется в плоском слое эпителия. В шиповатом и базальном слоях гликоген содержится в оболочке клеток и межклеточном веществе, но встречаются клетки, полностью заполненные им.
Кислые и нейтральные углеводсодержащие биополимеры чаще выявляются в плоском слое эпителия. Изредка кислые углеводсодержащие биополимеры содержатся в цитоплазме базального слоя эпителия.
На 90 день развития плода в стенке сетки видны соединительнотканные гребни ячеек I и II генерации, а гребни ячеек III генерации только начинают свое формирование. Возникают гребни путем врастания подлежащей соединительной ткани в эпителий слизистой оболочки. Гребни I генерации чаще всего имеют тонкое основание и широкую закругленную верхушку, их высота составляет 0,094+0,003 мм. У гребней II порядка основание и верхушка одинаковой толщины. У основания ячеек I генерации сформированы по одному, а иногда и по два сосочка. Внутри ячеек 1 и II генерации проходят мышечные тяжи, состоящие из 2-4 слоев гладкомышеч-ных клеток, плотно прилегающих друг к другу. По бокам от мышечного тяжа проходит рыхлая неоформленная соединительная ткань, идущая из подслизистой основы и состоящая из тонких коротких коллагеновых волокон. Внутри гребней проходит сеть кровеносных сосудов.
В мышечной оболочке циркулярный мышечный слой внутренний,
мощный, в 2 раза больше продольного. Между мышечными слоями
проходит сеть кровеносных сосудов, а также межмышечное нервное сплетение.
В начале позднеплодного периода развития (105 дней) общая толщина стенки увеличивается на 164%, при этом толщина слизистой оболочки возрастает на 157,5%, а мышечная уменьшается на 10,9% по сравнению со стенкой 90-дневного плода. При этом видно, что в начале позднеплодного периода развития более интенсивно развивается слизистая оболочка, составляя 51,3% от толщины всей стенки.
На 105-й день развития плода продолжается формирование специфических структур слизистой оболочки стенки сетки. Высота гребней ячеек I генерации равна 0,143±0,068 мм.
Клетки базального слоя в местах формирования ячеек III генерации и сосочков в ячейках I и II генерации находятся в состоянии активного митотического деления.
Содержание нуклеиновых кислот в базальном слое (+ + +), в шиповатом (+)■ Цитоплазма базальных клеток содержит много общего белка, в шиповатом слое общий белок содержится вокруг ядерной оболочки.
Цитоплазма шиповатого слоя эпителия в начале позднеплодного периода развития богата гликогеном. В базальных клетках гликоген расположен в виде пылевидной зернистости по всей цитоплазме. В плоском эпителии цитоплазма полностью заполнена гликогеном, в клетках гниловатого слоя он заполняет половину или третью часть клетки. Изредка встречаются клетки, в которых гликоген представлен единичными гранулами (верх слоя). Для всего эпителиального пласта характерна тенденция преимущественной концентрации гликогена в базальной части клеток, а также локализация у клеточных мембран. Можно предположить, что гликоген здесь не только синтезируется, но и активно расходуется.
Нейтральные углеводсодержащие биополимеры в незначительном количестве содержатся в плоском слое эпителиального пласта, а также встречаются гранулы в верхних слоях шиповатого слоя. Кислые углеводсодержащие биополимеры находятся в плоском слое эпителия.
На ячейках I генерации имеются несколько сосочков. Внутри гребней проходит сеть кровеносных сосудов.
Во всех оболочках стенки сетки липиды содержатся в мембранах клеток. В эпителиальном пласте имеются единичные пылевидные включения липидов. В мышечной оболочке — включения липидов в виде больших гранул.
Нейтральные углеводсодержащие биополимеры в малом количестве выявлены в подслизистой основе и мышечной оболочке.
В позднеплодном периоде (120 дней) стенка сетки увеличивается на 36,7%, в 135 дней уменьшается на 52,5%, а перед рождением повышается
на 96,3% по сравнению с началом позднеплодного периода развития стенки сетки. Слизистая оболочка на 120 день развития плода увеличивается на 34,4%, внутри стенки она составляет до 50,5% по сравнению с мышечной оболочкой, которая вырастает на 78,1%, а содержание ее внутри стенки равно 30,5% от толщины стенки сетки 105-дневного плода. На 135-й день развития плода, вместе со стенкой сетки, происходит уменьшение ели зи-стой оболочки на 33,9%, от всей стенки сетки она составляет 70,3%, тогда как мышечная оболочка падает на 73,6% по сравнению с внутристеноч-ным содержанием, равным 16,9%. Перед рождением слизистая оболочка начинает увеличиваться на 9,7%, а мышечная на 245,7%, внутри стенки их процентное соотношение равно 29,8% и 39,3%.
В позднеплодном периоде развития и до самого рождения плода стенка сетки продолжает утолщаться и вместе с ней происходит увеличение как слизистой, так и мышечной оболочек.
В 120 дней гребни ячеек I генерации доходят почти до верха эпителиального пласта, от их стенок продолжают врастать в эпителий соединительно-тканные сосочки, которые располагаются по всей поверхности. Высота их, в этот период, составляет 0,146±0,0011 мм. К рождению гребни ячеек I генерации достигают плоского слоя эпителия и вырастают до 0,178±0,006 мм. Гребни ячеек 11 и ТП генерации не имеют сосочков.
Суммарное количество нуклеиновых кислот в эпителии стенки сетки 120 дневного плода составляет (+ +), перед рождением повышается до (+ + + +). Клетки эпителиального пласта содержат общий белок, количество которого с возрастом увеличивается. Локализуется общий белок в цитоплазме, ядре, по ходу плазмалеммы клеток. Наиболее богата общим белком цитоплазма базальных клеток.
Локализация гликогена в эпителии сетки поздних плодов аналогична описанной выше в начале позднеплодного периода. К концу позднеплодного периода намечается тенденция уменьшения количества гликогена в эпителии слизистой оболочки сетки. Однако вплоть до рождения количество его остается значительным.
Нейтральные углеводсодержащие биополимеры локализуются в цитоплазме клеток плоского слоя эпителия и в верхних 3—4 рядах шиповатого слоя. Из них 1—2 ряда полностью заполнены нейтральными уг-леводсодержащими биополимерами и при малом увеличении микроскопа имеют вид интенсивно окрашенной полоски. Содержат ней тральные углеводсодержащие биополимеры базальная мембрана и подлежащая соединительная ткань, в особенности у основания сосочков.
Кислые углеводсодержащие биополимеры содержатся в плоском слое эпителия.
В мышечной оболочке циркулярный слой довольно мощный и по толщине превышает продольный в два раза.
На 120-й день развития плода количество липидов в стенке сетки незначительное. К рождению в слизистой оболочке они появляются в виде крупных гранул.
Таким образом, рост стенки сетки плодов овец ставропольской породы в пренатальном периоде онтогенеза сопровождается диффе-ренцировкой морфологических структур слизистой оболочки, депонированием гликогена и формированием защитного слоя.
Гистологическая и гистохимическая характеристика стенки книжки плодов овец в пренатальном онтогенезе
В раннеплодном периоде развития (45 дней) в стенке книжки хорошо различимы слизистая оболочка, подслизистая основа, мышечная и серозная оболочки.
Толщина стенки книжки, в этот период развития, составляет 0,372±0,0125 мм. Из них на слизистую оболочку приходится 0,112±0,009 мм, а на мышечную 0,092+0,007 мм.
Морфологические структуры слизистой оболочки книжки дифференцируются раньше, чем в других преджелудках. Уже к 45 дням в книжке сформированы листочки I порядка (большой), II порядка (средний), III порядка (малый) и IV порядка (самый малый). В книжке листочки образуются за счет одновременного разрастания соединительной ткани и эпителия, прогибания базальной мембраны и выпячивания зачатка листочка в полость органа.
Листочки I порядка сильно удлинены и в высоту равны 2,372±0,095 мм, листочки II порядка располагаются между листочками I порядка и составляют 1,267±0,064 мм. Листочки III порядка лежат между I и II, их высота 0,334+0,011 мм. Листочки IV порядка только начинают свое формирование, достигают в высоту размера 0,013±0,002 мм. Порядок чередования их такой: большой, самый малый, малый, самый малый, средний, самый малый, малый, самый малый, большой. Затем эта очередность повторяется и сохраняется до конца всего пренаталъного онтогенеза.
В больших и средних листочках просматривается тяж из гладкомы-ШечНых клеток, отходящий от продольного слоя мышечной оболочки. Гладкомышечные клетки лежат в два слоя в направлении от основания листочков к их вершинам, где они спиралевидно закручиваются. По бокам от гладкомышечного тяжа располагается рыхлая неоформленная соединительная ткань из коллагеновых волокон.
Эпителиальный слой представлен многослойным плоским неоро-говсвающим эпителием, в базальном слое которого видно много клеток, находящихся в состоянии митотического деления.
Суммарное содержание нуклеиновых кислот в эпителии слизистой оболочки (+ + + +). Общий белок выявляется в цитоплазме и ядрах клеток, а также в базальной мембране.
Раннеплодный период характеризуется активным синтезом всеми клетками эпителия гликогена. Располагается он в виде мелких и крупных гранул, рассеянных по цитоплазме. Нейтральные и кислые угле-водсодержащие биополимеры в эпителии не выявлены
Мышечная оболочка состоит из наружного, продольного, мышечного слоя. Циркулярный слой, внутренний, сформирован частично.
Между мышечной и серозной оболочками проходит сеть кровеносных сосудов. Серозная оболочка состоит из соединительной ткани и клеток мезотелия.
К концу среднеплодного периода развития плода (90 дней) сначала в больших, а затем и средних листочках мышечная основа представлена срединным и двумя боковыми слоями. Последние отходят от мышечной пластинки слизистой оболочки и тянутся в виде тяжей по длине листочков. В основе слизистой оболочки этих листочков образуются закладки вторичных структур (сосочков) путем врастания соединительной ткани в эпителиальный пласт с прогибанием базальной мембраны. Малые и самые малые листочки в конце среднеплодного периода развития стенки книжки мышечной прослойки не содержат и сосочки в них еще не закладываются.
Высота листочков I порядка на 90 день развития плода достигает 2,421+0,008 мм, листочки II порядка равны 1,315+0,027 мм, III порядка доходят до 0,39±0,028 мм, а листочки IV - 0,038±0,006 мм
Толщина стенки книжки к концу среднеплодного периода развития увеличилась на 0,8%, слизистая оболочка выросла на 10,7%, а мышечная уменьшается на 25% и, вследствие этого, содержание слизистой в стенке книжки, составило 32,6%.
Наибольшее количество нуклеиновых кислот находится в базальном слое эпителия (+ + + +), в шиповатом слое (+ +) и по повышению слоев сходят на min. Локализация общего белка в эпителии книжки аналогична его расположению в эпителии рубца и сетки. Наиболее богаты белком базальные клетки. В цитоплазме шиповатого слоя и поверхностных клеток содержится незначительное количество общего белка.
Гликоген выявляется в базальных клетках в виде мелких зерен, иногда видны зерна у базальной мембраны. В шиповатом слое гликоген располагается неодинаково: в одних клетках крупные глыбки заполняют всю цитоплазму, в других — имеются отдельные гранулы. Нейтральные углеводсодержащие биополимеры выявляются пылевидными включениями в плоском слое эпителия. Кислые углеводсодержащие биополимеры обнаруживаются в соединительной ткани листочков I порядка, а иногда проявляются в плоском слое эпителия.
Липиды в виде мелких капель в цитоплазме, а иногда и ядрах клеток встречаются чаще в шиповатом слое эпителия.
Нейтральные углеволсодержащие биополимеры пылевидными включениями выявляются в мышечной оболочке в небольшом количестве.
К началу позднеплодного периода плода (105 дней) стенка книжки увеличилась на 1,3%, слизистая выросла на 20,2%, а мышечная увеличивается на 98,6% по сравнению со стенкой книжки 90-дневных плодов, хотя процентное их соотношение слизистой и мышечной оболочек практически одинаковое — 39,7% и 36,5%.
Вместе с ростом стенки книжки продолжают расти и листочки. На 105-й день развития листочки I порядка достигают в высоту 3,186±0,051 мм, листочки II порядка - 1,327+0,079 мм, III и IV порядков, соответственно, - 0,435+0,032 мм и 0,052+0,005 мм.
На 105-й день развития плода в эпителий листочков I и II порядков глубже врастают соединительно-тканные сосочки. В листочках III и IV порядков дифференцируется мышечный слой слизистой оболочки. Мышечные пучки во всех четырех видах листочков ближе к свободным их краям сливаются, т. е. к верхушкам листочков, образуя крупные мышечные тяжи. К этому сроку и на малых листочках возникают соединительнотканные сосочки, лишь на листочках IV порядка они отсутствуют. В листочках проходит сеть кровеносных сосудов, ветви которых идут в сосочки.
Реакция на нуклеиновые кислоты в базальном слое (+ + + +), выше по эпителию — (+ +) и у плоского слоя сходит на min. Общий белок расположен в ядрах клеток и по периферии клеток.
Гликоген, нейтральные и кислые углеводсодержащие биополимеры просматриваются во всех клетках эпителиального слоя слизистой оболочки, особенно сильно ими заполнен плоский слой.
В мышечной оболочке циркулярный слой намного больше продольного. В мышечной оболочке просматривается межмышечное нервное сплетение.
В последующем на протяжении позднеплодного периода развития стенка книжки продолжает увеличиваться, и на 120-й день развития, по сравнению со 105-м днем, стенка увеличилась на 75,3%, слизистая при этом выросла на 8,1%, а мышечная на 65,7%. Через 15 дней (135 сутки развития плода) стенка резко падает на 62,1 %, слизистая уменьшается на 54,7%, а мышечная на 7,5%. Перед рождением стенка начинает заново утолщаться на 59,1%, при этом слизистая увеличивается на 127,4%, мышечная же, наоборот, продолжает уменьшаться на 15,2%.
Что касается процентного соотношения слизистой оболочки к мышечной оболочке в позднеплодном периоде развития плода, то в 120 дней слизистая оболочка составляет 24,1%, мышечная 34% от толщины стенки книжки. На 135-й день слизистая оболочка равна 28,9%, а мышечная — 83,3%. Перед рождением процент слизистой оболочки равен 41,3%, мышечной - 44,3%. 16
Наряду с ростом стенки книжки, в пренатальном онтогенезе продолжают расти и листочки.
Листочки I порядка в 120 дней равны 3,224±0,052 мм, на 135-й день развития они составляют 3,337±0,083 мм и перед рождением достигают 4,349±0,321 мм. Листочки П порядка на 120-й день равны 1,344+0,073 мм, на 135-й день они вырастают до 1,610±0,023 мм и перед рождением достигают 2,039+0,078 мм. Листочки III порядка в 120 дней растут до 0,463±0,035 мм, на 135-й день доходят до 0,492±0,05 мм, перед рождением 0,5±0,031 мм.
Листочки IV порядка в 120 дней вытягиваются на 0,058+0,006 мм, в 135 дней 0,065+0,009 мм, перед рождением вырастают до 0,08±0,023 мм.
В 120 дней развития плода, в стенке книжки, между сосочками, образуются небольшие углубления, вследствие разъединения и уплотнения клеток шиповатого слоя. Перед рождением сосочки достигают плоского слоя эпителия.
Суммарное содержание нуклеиновых кислот в базальном слое эпителия у 120-дневных плодов (+), перед рождением повышается до (+ + +).
Клетки эпителия книжки, в позднеплодном периоде развития плодов, обладают высокой гликогенсинтезирующей и гликогендепони-рующей функциями. К концу позднеплодного периода развития, особенно к моменту рождения, намечается тенденция к уменьшению гликогена, хотя по-прежнему количество его остается значительным, в особенности, в эпителии между листочками.
Нейтральные и кислые углеводсодержащие биополимеры выявляются в плоском слое эпителиального пласта. Углеводсодержащие биополимеры концентрируются по ходу клеточных мембран.
Липиды в клетках шиповатого слоя встречаются редко мелкими каплями, в базальном слое капель — больше.
В мышечной оболочке циркулярный слой больше продольного.
Таким образом, в слизистой оболочке стенки книжки эпителий, вплоть до рождения, несет гликогенсинтезирующую, метаболическую функции и формирует защитную.
Гистологическая и гистохимическая характеристика стенки сычуга плодов овец в пренатальном онтогенезе
В раннеплодном периоде развития плодов (45 дней) на внутренней поверхности сычуга путем выпячивания образуются продольные складки слизистой оболочки, хорошо отграниченные друг от друга. Стенка сычуга сформирована и состоит из слизистой оболочки, подслизистой основы, мышечной и серозной оболочек.
Толщина стенки сычуга равна 0,269+0,028 мм, на слизистую приходится 0,054+0,005 мм, а на мышечную — 0,113±0,019 мм.
В слизистой оболочке начинает формироваться однослойный призматический железистый эпителий, а также происходит закладка «га-стронов» т. е. формирование желудочных ямок и желез.
Мышечная оболочка состоит из внутреннего циркулярного и наружного продольного мышечных слоев, между которыми просматривается межмышечное нервное сплетение.
Гликогена, нейтральных и кислых углеводсодержащих биополимеров в раннеплодный период развития в стенке сычуга не выявлено.
Эндокринных клеток не обнаружено.
В конце среднеплодного периода развития плода (90 дней) толщина С1енки сычуга увеличилась на 21,2%. При этом толщина слизистой возрастает на 124,1%, а мышечной — на 9,7%. Следовательно, в средне-плодный период развития стенки сычуга наиболее интенсивным ростом характеризуется мышечная оболочка, составляя 38% от всей стенки.
В слизистой оболочке сычуга на 90-й день развития плода встречаются единичные складки слизистой оболочки, в которых просматриваются железистые поля.
Железы сформированы, лежат друг к другу плотно в собственной пластинке слизистой оболочки. Желудочные ямки неглубокие, широкие. В каждую ямку впадает по одной или две железы. В некоторых железах можно различить шейку, тело и дно. Клеточный состав сформирован и состоит из главных и париетальных экзокриноцитов, слизистых и единичных эндокринных клеток.
Главные экзокриноциты находятся преимущественно на дне железы, ядра у них крупные. В цитоплазме видны единичные базофильные гранулы.
Париетальные экзокриноциты крупные с крупным круглым ядром и оксифильной цитоплазмой. Просматриваются клетки на всей протяженности железы, но наибольшее их скопление в теле железы.
Слизистые клетки располагаются в теле и шейке. Они крупные с овальным крупным ядром. Цитоплазма слабооксифильная.
Эндокринные клетки единичные, встречаются на дне железы. В цитоплазме клеток просматриваются мелкие гранулы светло-коричневого цвета.
Содержание гликогена в слизистой сычуга высокое, в цитоплазме клеток выявляется в виде гранул. Содержится он во всех клетках желез и в эпителии. Наибольшая концентрация гликогена в шейке и дне железы. Также в большом количестве гликоген выявляется в просвете желез и в виде хлопьев в надэпителиальной слизи.
Кислые углеводсодержащие биополимеры в виде зернистости находятся в цитоплазме париетальных и некоторых слизистых клеток, из которых они выходя г в просвет желез и продвигаются к надэпителиальной слизи, где становятся хлопьевидными. 18
Нейтральные углеводсодержащие биополимеры выявляются в апикальном полюсе клеток и в виде пылевидной зернистости по просвету железы выходят в надэпителиальную слизь.
Липиды содержатся мелкими каплями в цитоплазме железистых клеток.
За период от 90 дней, до 105 дней развития плода, стенка сычуга увеличилась на 214,9%, мышечная оболочка выросла на 74,2%, а слизистая, наоборот, потеряла в росте и уменьшилась на 11,6%. В связи с этим мышечная оболочка в стенке сычуга, у 105-дневных плодов составляет 56,6%.
В собственно слизистом слое железы лежат более рыхло. Желудочные ямки глубокие, широкие. Клеточный состав более дифференцирован.
В надэпителиальном слизистом слое количество слизи увеличивается.
Главные экзокриноциты находятся в теле и на дне железы, ядра в них крупные, овальные, интенсивно базофильные, лежат у базаль-ных полюсов клеток. В цитоплазме находится много крупных базо-фильных гранул, лежащих по периферии клеток.
Париетальные экзокриноциты крупные, с крупным круглым ядром и гипохромной цитоплазмой. Просматриваются клетки в теле железы.
Слизистые клетки различимы чаще в шейке железы. Они крупные с овальным крупным лежащим по центру ядром. Цитоплазма бледная.
Эндокринные клетки лежат на дне железы, количество их увеличивается. В цитоплазме клеток видны гранулы коричневого цвета. В некоторых железах гранулы рассеяны вокруг эндокринных клеток. Из чего следует вывод, что к позднеплодному периоду развития плодов в стенке сычуга происходит выброс из клеток полипептидных гормонов и аминов, которые участвуют в процессах регуляции и функционирования слизистой оболочки сычуга.
Содержание нейтральных и кислых углеводсодержащих биополимеров, а также гликогена не изменилось.
В конце позднеплодного периода развития (120 дней) стенка сычуга утолщается на 33,6%, слизистая — на 53,3%, мышечная - на 20,1 %. В самой же стенке мышечная равна 51,2%, слизистая 32,2%. На 135 день развития рост стенки сычуга снижается на 17,7% и вместе с ней уменьшаются и оболочки. Рост слизистой понижается на 21,9%, а мышечной на 28,4%. Наряду с этим процент содержания мышечной оболочки сычуга составляет 44,6%, а слизистой 30,5%. В период от 135 до 150 дней стенка сычуга увеличивается на 1,9%, слизистая — на 14,1%, мышечная — на 23,5%. Процентное содержание слизистой и мышечной оболочек перед рождением составляет 29,7% и 54%.
Железы в конце позднеплодного периода развития растут в длину и перед рождением становятся удлиненной формы с узким просветом. В просветах желез отмечается слизистый секрет.
К 120-му дню развития большая часть желез занята слизистыми клетками, в которых ядра уплощены и оттеснены к базальному полюсу.
Главные экзокриноциты содержат значительное количество базо-фильных гранул, которые располагаются у апикального полюса и в просвете железы. Количество главных экзокриноцитов сильно возрастает перед рождением и занимает большую часть железы, а слизистые меньшую, но все-таки значительную часть.
Париетальные экзокриноциты до 120-дневного возраста морфологически не изменялись. В них началось образование оксифильных гранул секрета.
Эндокринные клетки к 120 дню располагаются на дне железы. Перед рождением их гранулы находятся только вокруг главных клеток, что предполагает действие эндокринных клеток только на главные экзокриноциты.
Количество гликогена на протяжении позднеплодного периода развития уменьшается, но при этом остается значительным.
Нейтральные углеводсодержащие биополимеры в конце позднеплодного периода развития плода присутствуют во всех клетках желез сычуга в виде хлопьев. Кислые углеводсодержащие биополимеры в виде мелких гранул и зерен, выявляются чаще в слизистых клетках, а также редкими хлопьями в главных и париетальных клетках.
Таким образом, на основании вышеизложенных данных можно сделать вывод, что стенка сычуга, формирована к концу среднеплодного периода развития, но полная дифференцировка клеточного состава сычуга, в особенности слизистой оболочки, в пренатальном периоде онтогенеза происходит только перед рождением плода.
1. Рост камер желудка в пренатальном онтогенезе происходит с неодинаковой интенсивностью. В раннеплодный период наиболее энергично растет рубец, в позднеплодный — сычуг. Сетка и книжка в течение раннеплодного периода растут равномерно, а в позднеплодном периоде с несколько большей интенсивностью увеличивается масса сетки.
2. Слизистая, мышечная и серозная оболочки желудка плодов овец формируются к 45-дневному возрасту. Дальнейшее их утолщение происходит неравномерно. В раннеплодном периоде онтогенеза мышечная оболочка наиболее интенсивно увеличивается в рубце, в позднеплодном периоде и перед рождением в книжке и сычуге. В сетке мышечная оболочка интенсивно растет на протяжении всего пренатального онтогенеза и перед рождением до-
стигает наибольшей толщины и сложности расположения мышечных пучков, что обеспечивает ее многообразную моторику. Слизистая оболочка во внутриутробном развитии энергичнее утолщается в сетке и рубце.
На основании морфометрических и процентных данных и данных гистогенеза желудка плодов в позднеплодном периоде развития с 120-го дня по 135-й день выявлена критическая фаза развития в стенке желудка и его оболочек, связанная с дифференцировкой клеточного состава желудка, а также с высокой интенсивностью роста самих плодов и приростом массы тела. Формирование специфйческих структур слизистой оболочки в преджелудках происходит асинхронно. К концу среднеплодного периода развития плода в стенке рубца появляются сосочки, в сетке к этому периоду сформированы соединительно-тканные ячейки I и II порядка, а ячейки III порядка только начинают свое формирование, к началу позднеплодного периода развития они заканчивают свое формирование. В книжке, в 45-й дней развития, сформированы листочки всех порядков (1. Ii> и IV). В сычуге закладка гастронов (формирование желез и закладка желудочных ямок) начинается в раннеплодный период. В сред-неплодном периоде железистый аппарат стенки сычуга сформирован, имеются слизистые клетки, главные и париетальные эк-зокриноциты, из них секретируют слизистые клетки. Секреция главных экзокриноцитов отмечается только перед рождением. Париетальные экзокриноциты в течение плодного периода морфологически не изменяются. Только перед рождением в них начинается образование оксифильных гранул секрета. В сычуге, в среднеплодном периоде развития, появляются единичные эндокринные клетки, количество которых, к позднеп-лодному периоду развития, увеличивается. В этом же периоде в некоторых железах виден выброс гранул из эндокринных клеток, которые влияют на функционирование слизистой оболочки. К рождению гранулы эндокриноцитов находятся вокруг и действуют только на главные экзокриноциты. Эпителий преджелудков во все периоды пренатального онтогенеза активно участвует в углеводном обмене, выполняя функцию синтеза и депонирования гликогена. В сычуге эта функция начинается со среднеплодного периода развития плода. Защитная функция слизистой оболочки желудка обеспечивается накоплением в поверхностных клетках эпителиального пласта преджелудков и в железах сычуга, а также в надэпителиальном слизистом слое кислых и нейтральных углеводсодержащих биополимеров.
Полученные данные по морфофункциональному развитию многокамерного желудка овец в пренатальном онтогенезе могут быть использованы:
- при написании соответствующих разделов справочных и учебных пособий по цитологии, гистологии, эмбриологии и физиологии животных;
— чтении лекций и проведения практических занятий по цитологии, гистологии и эмбриологии для студентов ветеринарного, зоотехнического и общебиологического факультетов:
Основные положения и выводы диссертации используются в учебном процессе на кафедрах анатомии и гистологии в 4-х вузах России.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Дилекова, О. В. Гистологическое строение стенки книжки плода овцы ставропольской породы / О. В. Дилекова // XI итоговая (межвузовская) научная конференция студентов и молодых ученых : сб. науч. тр. / СГМА. — Ставрополь, 2003. — С. 72—73.
2. Лапина, Т. И., Дилекова, О. В. Гистологическое строение стенки книжки овцы в эмбриогенезе / Т. И. Лапина, О. В. Дилекова // Актуальные проблемы инвазионной, инфекционной и незаразной патологии : материалы Международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения проф. С. Н. Никольского. — Ставрополь, 2003. - С. 233-236.
3. Дилекова, О. В. Гистологическое строение стенки сетки плодов овец ставропольской породы первой половины беременности / О. В. Дилекова // Актуальные аспекты экологической, сравнительно-видовой, возрастной и экспериментальной морфологии : материалы Международной конференции, посвященной 100-летию проф. В. Я. Суетина. - Улан-Удэ, 2004. - С. 65-66.
4. Дилекова, О. В. Гистологическое строение преджелудка плодов овец ставропольской породы / О. В. Дилекова // Актуальные проблемы охраны здоровья животных : материалы Международной конференции, посвященной 65-летию факультета ветеринарной медицины СтГАУ. — Ставрополь, 2004. — С. 43—46.
5. Лапина, Т.Н. Гематологические показатели и естественная резистентность овец на первом месяце беременности / Т. И. Лапина, Т. Е. Банкина, Е. Е. Штехина, И. А. Белозерова, О. В. Дилекова// Актуальные проблемы охраны здоровья животных : материалы
Международной конференции, посвященной 65-летию факультета ветеринарной медицины СтГЛУ. — Ставрополь, 2004. — С. 56-57.
6. Дилекова, О. В. Рост и вес желудка и его камер плодов овец ставропольской породы в онтогенезе / О. В. Дилекова // Повышение эффективности лечения и профилактики акушерско-ги-некологических заболеваний и биотехники размножения животных : материалы Международной конференции, посвященной 75-летию Вятской государственной сельскохоз. академии. - Киров, 2005. - С. 49-50.
7. Дилекова, О. В. Гистологическое строение сычуга плодов овец ставропольской породы / О. В. Дилекова // Актуальные вопросы зоотехнической и ветеринарной науки и практики в АПК : материалы научно-практической конференции. - Ставрополь, 2005. -С. 155-156.
8. Дилекова, О. В. Гистологическая характеристика стенки сычуга плодов овец ставропольской породы / О. В. Дилекова //Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохоз. животных : материалы 69-й научно-практической конференции. - Ставрополь, 2005. - С. 12-13.
РНБ Русский фонд
Подписано и печать 21.11 2005 Формат 60x84'/^ Бумага офсетная Гарнитура «Times». Печать офсетная. Уел нем. л 1,4 Тираж 150 экз. Заказ №752.
Налоговая льгота — Общероссийский классификатор продукции ОК 005-93-953000
И жительство Ставропольского государственного аграрного университета «АГРУС», г.Ставрополь, пер. Зоотехнический, 12. Тел /факс (8652) 35-06-94. E-mail agrus@stgau.ru; http://www.agrus.stgau.ru.
Отпечатано в типографии и шательско полиграфического комплекса СтГАУ «АГРУС», г.Ставрополь, ул. Мира, 302