. ГЕНЕТИКА ОСТРЫХ ЛЕЙКОЗОВ У ДЕТЕЙ ПЕРВОГО ГОДА ЖИЗНИ
ГЕНЕТИКА ОСТРЫХ ЛЕЙКОЗОВ У ДЕТЕЙ ПЕРВОГО ГОДА ЖИЗНИ

ГЕНЕТИКА ОСТРЫХ ЛЕЙКОЗОВ У ДЕТЕЙ ПЕРВОГО ГОДА ЖИЗНИ

1 ГЕНЕТИКА ОСТРЫХ ЛЕЙКОЗОВ У ДЕТЕЙ ПЕРВОГО ГОДА ЖИЗНИ Цаур Григорий Анатольевич, к.м.н. Областная детская клиническая больница 1 Институт медицинских клеточных технологий г. Екатеринбург VI Съезде детских онкологов России с международным участием «Достижения и перспективы детской онкологии» Октября 2015 г., Москва

2 Уникальные клинико-биологические характеристики Высокий инициальный лейкоцитоз Высокая частота экстрамедуллярных поражений Частое инициальное поражение ЦНС Перестройки 11q23/MLL у большинства пациентов Совершенно особенный профиль экспрессии генов ОЛЛ+ОМЛ = Острые лейкозы первого года жизни (Infant acute leukemia)

3 Недостаточная эффективность терапии при ОЛЛ Interfant-99 (n=481) MLL-Baby (n=108) 1,0 0,9 0,8 Cumulative Proportion Surviving 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 EFS 0,53 SE 0,05 0,2 0,1 R. Pieters et al Lancet Oncology : , Time L. Fechina et al Pediatric Blood and Cancer ,S3: 63 Заболеваемость ОЛ

30,0 на 1 млн ежегодно в РФ должно быть случаев ОЛЛ и около 20 случаев ОМЛ

4 Результаты терапии ОМЛ у детей первого года жизни AML-BFM 98/2004 (n=125) БСВ ОВ U. Creutzig et al Leukemia ,

5 109 42,9% Пациенты и методы ,1% Диагностический метод ОЛЛ n=172 ОМЛ n=75 Другие ОЛ* n=7 Всего n=254 Цитогенетика FISH ОТ-ПЦР Иммунофенотипирование Секвенирование ДИ-ПЦР * Другие ОЛ Острый недифференцированный лейкоз (ОНдЛ), острый бифенотипический лейкоз (ОБфЛ), Острый билинейный лейкоз (ОБлЛ)

6 Сравнительная характеристика типов ОЛ в зависимости от возраста Дети первого года жизни (n=251) Дети старше 1 года (n=427) P<0,001 для ОЛЛ P<0,001 для ОМЛ

7 Цитогенетические подгруппы ОЛЛ и ОМЛ Показатель ОЛЛ ОМЛ Другие ОЛ абс. % абс. % абс. % Кол-во информативных исследований Нормальный кариотип 26 24,3 6 9,5 3 Транслокации 11q23* 64 59, ,4 2 Высокая гипердиплоидия (n=51-65) 2 1,8 Гиподиплоидия (n 44) 1 0,9 t(1;19)(q23;p13) 1 0,9 t(9;22)(q34;q11) 1 0,9 t(1;22)(p13;q13) 5 7,9 Inv16(p13q22) 3 4,8 Другие (случайные) изменения кариотипа *учтены только данные цитогенетики 12 11, ,3 1

8 Цитогенетические подгруппы ОЛЛ и ОМЛ Показатель ОЛЛ ОМЛ Другие ОЛ абс. % абс. % абс. % Кол-во информативных исследований Нормальный кариотип 26 24,3 6 9, Транслокации 11q23* 64 59, ,4 2 Высокая гипердиплоидия (n=51-65) 2 1,8 Гиподиплоидия (n 44) 1 0,9 t(1;19)(q23;p13) 1 0,9 t(9;22)(q34;q11) 1 0,9 t(1;22)(p13;q13) 5 7,9 Inv16(p13;q22) 3 4,8 Другие (случайные) изменения кариотипа *учтены только данные цитогенетики 12 11, ,3 1

9 Выявление перестроек 11q23/MLL у пациентов с ОЛЛ * Цитогенетика, FISH, ПЦР ОЛЛ: 113 случаев 11q23/MLL (+) из 172 обследованных* (65,7%)

10 Типы химерных транскриптов MLL-AF4 % 19% Данные литературы <1% 23% 18% <10% 31% 8% 55% <10%

11 Выявление перестроек 11q23/MLL у пациентов с ОМЛ * Цитогенетика, FISH, ПЦР ОМЛ: 42 случая 11q23/MLL (+) из 75 обследованных* (56,0%)

12 Частота встречаемости перестроек 11q23/MLL в зависимости от возраста ОЛЛ p<0,001 ОМЛ p=0,843

13 Локализация точек разрыва в ДНК гена MLL методом ДИ-ПЦР ОЛЛ ОМЛ

14 Связь возраста с локализацией точек разрыва в ДНК гена MLL Локализация точки разрыва в ДНК гена MLL Медиана, мес ОЛЛ Диапазон мес P* Медиана, мес ОМЛ Диапазон мес P** Все пациенты 3,6 0,03-11,9 8,0 0,8-11,9 Интрон 11 3,0 0,03-11,6 10,8 6,1-11,0 0,109 Все остальные, кроме интрона 11 (ОЛЛ) 5,6 0,7-11,9 0,025 Интрон 9 6,6 3,1-11,9 0,017 5,8 0,8-11,2 Интрон 10 4,2 0,7-9,2 0,324 6,8 2,2-11,9 0,570 Все остальные, кроме интрона 9 (ОМЛ) 9,3 2,2-11,9 0,114 * p рассчитано по отношению к пациентам с ОЛЛ, у которых точка разрыва в ДНК гена MLL располагалась в интроне 11 ** p рассчитано по отношению к пациентам с ОМЛ, у которых точка разрыва в ДНК гена MLL располагалась в интроне 9

15 Механизмы образования химерных генов Химерный ген в исследуемой группе Реципрокная транслокация Инсерция Транссплайсинг MLL-AF4 (n=29) 29 MLL-MLLT1 (n=12) 3 9 MLL-MLLT3 (n=14) 14 MLL-MLLT10 (n=6) 6 MLL-EPS15 (n=6) 3 1 MLL-MLLT11 (n=2) 2 MLL-MYO1F (n=2) 1 1 MLL-AFF3 (n=1) 1 MLL-SEPT6 (n=1) 1 MLL-SEPT9 (n=1) 1 ИТОГО

16 Транс-сплайсинг при MLL-MLLT1-позитивных случаях DNA Intron 1 Intron 2 Intron bp 8268 bp bp Exon 5 Exon 6 (138bp)(741 bp) Exon 1 (12 bp) Exon 2 (181 bp) Exon 3 (83 bp) Exon 4 (144 bp) bp ACER1 MLLT1 o У 10 из 15 MLL-MLLT1-позитивных пациентов механизм образования химерного гена транс-сплайсинг o Точки разрыва располагаются на расстоянии от до пар нуклеотидов от 1 экзона гена MLLT1 o Расстояние между генами ACER1 и MLLT1 составляет пар нуклеотидов

17 Транс-сплайсинг при MLL-MLLT1-позитивных случаях DNA Intron 1 Intron 2 Intron bp 8268 bp bp Exon 5 Exon 6 (138bp)(741 bp) Exon 1 (12 bp) Exon 2 (181 bp) Exon 3 (83 bp) Exon 4 (144 bp) bp ACER1 MLLT1 MLL* ` MLLT1 / ENL NM_ cdna n=4 n=6

18 Редкие гены-партнеры MLL n=1 (ранее описано 11) SEPT9 (17q25) AFF3 (2q11.2) n=1 (ранее описано 5) MLL n=1 (ранее описано 9) SEPT6 (Xq24) MYO1F (19p13.3) n=2 (ранее описано 3)

19 Прогностическое значение перестроек 11q23/MLL у пациентов с ОМЛ Бессобытийная выживаемость Общая выживаемость 0,44 ± 0,11 0,55 ± 0,10 0,32 ± 0,08 0,36 ± 0,13 Log-rank p=0,172 MLL (+) (n=37) MLL (-) (n=31) Log-rank p=0,363 Кумулятивная вероятность рецидива MLL (+) (n=37) MLL (-) (n=31) Медиана времени наблюдения 25 мес 0,49 ± 0,11 0,41 ± 0,13 p (Gray)=0,172

20 ATRA ATRA ATRA ATRA ATRA ATRA ATRA ATRA Схема протокола MLL-Baby с указанием точек наблюдения (ТН) для оценки МОБ TН1 TН2 TН3 TН4 TН5 TН6 только МОБ(+) Консолидация I +ATRA Консолидация II +ATRA Консолидация III +ATRA Поддерж. терапия + 8 курсов ATRA IRG Профаза DEXA Индукция День 36 Протокол MLL-Baby HRG 12 Gy только > 12 мес с инициальным нейролейкозом HR I HR II HR III HR I HR II HR III протокол II +ATRA Поддерж. терапия + 8 курсов ATRA только МОБ(+) Дни TН1 TН2 TН3 TН4 TН5 TН6 TН7 TН8 TН9 Недели Критерии стратификации: HRG t(4;11)(q21;q23) / MLL-AF4 или день 36/43 nonresponder IRG любые другие перeстройки 11q23/MLL или отсутствие перестроек 11q23/MLL в случае достижения клинико-гематологической ремиссии на день 36 L. Fechina et al, Blood 2007 Vol. 110, # 2828

21 Прогностическое значение перестроек 11q23/MLL у пациентов с ОЛЛ Interfant-99 MLL-Baby R. Pieters et al Lancet Oncology : L. Fechina et al Pediatric Blood and Cancer ,S3: 63

22 Связь точки разрыва в ДНК гена MLL c прогнозом пациентов с ОЛЛ 46 пациентов с ОЛЛ, включенных в исследование MLL-Baby Бессобытийная выживаемость Кумулятивная вероятность рецидива 0,74 SE 0,09 0,38 SE 0,14 0,52 SE 0,17 0,16 SE 0,07 Log-rank p=0,039 p (Gray) =0,045 IИнтрон 11 (n=29) Другие (n=17) Интрон 11 Другие Медиана времени наблюдения 36 мес

23 Связь точки разрыва в ДНК гена MLL c прогнозом пациентов с ОМЛ 22 пациента с ОМЛ Бессобытийная выживаемость Кумулятивная вероятность рецидива 0,66 SE 0,37 0.,40 SE 0,13 0,39 SE 0,09 0,40 SE 0.21 Log-rank p=0,728 p (Gray) =0,180 Интрон 11 (n=5) Другие (n=17) Интрон Intron Others Другие Медиана времени наблюдения 22,3 мес

24 Характеристика MLL-ассоциированного иммунофенотипа ОЛЛ ОМЛ Отсутствие экспрессии CD10 Отсутствие экспрессии CD20 Диагностическая эффективность (%) 76,4 81,2 Экспрессия CD45 81,9 Экспрессия CD133 76,5 Экспрессия CD15 67,7 Экспрессия СD65 53,7 Экспрессия NG2 90,6 Диагностическая эффективность (%) Экспрессия CD133 75,0 Экспрессия CD99 78,3 Экспрессия CD15 80,6 Экспрессия CD65 83,3 Экспрессия CD4 75,0 Отсутствие экспрессии CD61 71,9 Экспрессия NG2 89,7 Экспрессия CD11b 95,0

25 Цитогенетические показатели неблагоприятного прогноза ОМЛ у детей Частота встречаемости t(10;11)(p12;q23) / MLL-MLLT10 3% t(6;9)(p23;q34) / DEK-NUP214 2% inv(3)(q21q26.2) / RPN1-EVI1 <1% t(7;12)(q36;p12) / HLXB9-RUNX1 <1% t(5;11)(q35;p15.5) <1% У кого выявляется Преимущественно дети 1 года жизни Преимущественно дети 1 года жизни U. Creutzig et al Blood (16),

26 Выявление транслокации t(7;12)(q36;p13) Распределение сигналов 7 (N) B der(7) B+G 12 (N) O+G Der(12) O+G+B 17 (N) B der(7) B+G 12 (N) O+G Der(12) O+B 7 (N) B der(7) G 12 (N) O+G Der(12) O+G+B Транслокация 48,XX,+19+22, t(7;12) (q36;p13), inv(16)(p13q22) 47,XX,+19/idem, t(7;12)(q36;p13), +mar 48,XX,+19, t(7;12)(q36;p13) 46,XX,der(7)t(7;12) (q11;p13)del(7)(q11q36)

27 Прогностическое значение транслокации t(7;12)(q36;p13) Кумулятивная вероятность рецидива Общая выживаемость 0,80 ± 0,63 0,60 ± 0,21 0,43 ± 0,08 0,43 ± 0,08 p (Gray)=0,784 Log-rank p=0,572 t(7;12)(+) (n=6) t(7;12)(-) (n=62) t(7;12)(+) (n=6) t(7;12)(-) (n=62) Медиана времени наблюдения 25 мес

28 Молекулярно-генетические маркеры ОМЛ Пациенты > 1 года Мутации 1 класса (передача сигнала) 47% Мутации 2 класса (факторы транскрипции) 7% Мутации 3 кл. 13% 33%

29 Заключение 1. Молекулярно-генетические характеристики, типичные для острых лейкозов у детей старше 1 года, редко выявляются у детей первого года жизни. 2. Для этой группы пациентов типичны перестройки 11q23/MLL 3. Показана взаимосвязь между локализацией точки разрыва в ДНК гена MLL в прогнозом ОЛЛ при лечении по протоколу MLL-Baby 4. Неблагоприятная роль транслокации t(7;12) может быть преодолена проведением ТГСК в первой ремиссии

30 Благодарность Екатеринбург С.Ю. Ковалев Киров: В.А. Овсепян Минск: О.В. Алейникова Е.В. Волочник А.М. Кустанович Москва: О.В. Каленник Т.В. Наседкина Ю.В. Ольшанская Е.А. Матвеева А.В. Попа О.И. Сокова Е.В. Флейшман Санкт-Петербург Т.Л. Гиндина И.С. Мартынкевич Франкфурт-на- Майне C. Meyer R. Marschalek Челябинск И.В. Шмунк Лаборатория молекулярной биологии Т.О. Ригер А.С. Демина О.М. Плеханова Е.С. Нохрина А.Е. Друй ОДКБ 1 Л.Г. Фечина Л.И. Савельев А.М. Попов Е.В. Шориков О.В. Стренева

📎📎📎📎📎📎📎📎📎📎