Исследование CD3+CD4+CD8+ субпопуляции лимфоцитов периферической крови пациентов с возрастной макулярной дегенерацией
Возрастная макулярная дегенерация (ВМД) – хроническое необратимое прогрессирующее поражение центрального отдела сетчатки, является одним из самых распространенных заболеваний глаз, угрожающих значительным снижением центрального зрения во второй половине жизни человека. Рост, «омоложение» заболеваемости и значительный риск инвалидности трудоспособного населения делают ВМД серьезной медико-социальной проблемой [3, 7]. Несмотря на многочисленные исследования, патогенез развития заболевания изучен не полностью. Доказательства прямой зависимости частоты заболевания от возраста позволяют говорить об инволюционном характере заболевания и рассматривать возраст как серьезный фактор риска [2].
Помимо пожилого возраста и других предпосылок (курения, генетической предрасположенности, сосудистых заболеваний, в т.ч. атеросклероза, гипертонической болезни и др.) существенный вклад в возникновение и прогрессирование ВМД вносят иммунологические факторы. Однако роль нарушений в различных звеньях системного иммунитета при ВМД остается неясной, данные о сдвигах в (суб)популяционном составе лимфоцитов периферической крови активно обсуждаются. Вместе с этим развитию иммунных нарушений могут способствовать «редкие», минорные субпопуляции лимфоцитов, в частности, дубль позитивные Т-клетки –CD3+CD4+CD8+ лимфоциты. Мембранные молекулы CD4 и CD8 являются ко–рецепторами комплекса TСR-CD3 и рассматриваются как основные маркеры определения Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов. До недавнего времени считалось, что одновременно CD4 и CD8 появляются на мембране лимфоцитов только на стадии β-селекции при их развитии в тимусе. Обнаружение CD4+CD8+ клеток в периферической крови считалось неким артефактом, связанным с преждевременным выходом незрелых лимфоцитов из тимуса или признаком активации цитотоксических Т-лимфоцитов [1]. К настоящему времени установлено, что представители данной субпопуляции лимфоцитов являются высокодифференцированными клетками памяти [4]. Значение увеличения количества этих клеток остается во многом необъяснимым, хотя считается, что дубль-позитивные Т-лимфоциты могут иметь большое значение в реакциях адаптивного иммунитета в ответ на различные инфекционные агенты. Имеются сведения о повышении содержания дубль-позитивных Т-лимфоцитов при длительной антигенной стимуляции, при персистирующей патологии, в частности, при инфекционных заболеваниях, миастении, рассеянном склерозе и др., а также в старческом возрасте [5]. Однако в аспекте офтальмоиммунологии исследования, посвященные данной субпопуляции Т-клеток, единичны [6].
Цель – изучение содержания СD3+CD4+CD8+ лимфоцитов в крови больных ВМД различной степени тяжести, здоровых лиц пожилого и молодого возраста.
Материал и методы. В исследование было включено 47 человек. В 1-ю группу вошли 18 здоровых лиц молодого возраста (27,7±4,03 лет; контрольная группа), во 2-ю группу – 11 практически здоровых доноров пожилого возраста без признаков офтальмопатологии (57,1±11,8 лет), 18 пациентов составили 3-ю и 4-ю группы, сформированные согласно клинической классификации ВМД (AREDS): 9 человек с начальной (группа AREDS2; 53,2±11,5 года) и 9 – с промежуточной стадией ВМД (группа AREDS3; 57,1±11,8 лет).
Материалом исследования служили пробы цельной крови, взятой из локтевой вены при помощи стандартных вакуумных систем в пробирки Vaсuette® c антикоагулянтом К3EDTA. Состав лимфоцитов оценивали методом лазерной проточной цитофлуориметрии (цитометр BD FACSCantoII, CША). Содержание (суб)популяций определяли в программе Canto («Becton Dickinson», CША) с выделением региона по общей популяции, экспрессирующей CD45+ антиген и по гранулярности клеток (CD45+PerCP–Cy5,5*/SSC); при помощи меченных флуорохромами антител к СD3+(FITC), CD4+(PE–Cy7*), CD8+(APC–CY7*), позволяющих дифференцировать клетки: Т-лимфоциты (CD3+), Т-хелперы (CD3+CD4+CD8–), T-цитотоксические (СD3+CD4–CD8+), T-«дубль позитивные» (СD3+CD4+CD8+). Статистическая обработка проведена в программе BioStat для Windows Version 2009; критерий статистической значимости: p<0,05.
Результаты и обсуждение. Сравнительный анализ выявил достоверные различия между контрольной (лица молодого возраста) и остальными исследуемыми группами (табл.): самое низкое содержание Т-дубль позитивных клеток (как абсолютное, так и относительное) отмечено в контрольной группе: полученные значения в целом соответствовали данным литературы о возрастных нормах для молодых людей.
Во 2-й группе (высокий риск ВМД; AREDS1), а также у пациентов с AREDS2 и AREDS3 стадиями ВМД абсолютное и относительное количество CD3+CD4+CD8+ лимфоцитов возрастало более чем в 2 раза по сравнению с контролем. При этом статистически значимого отличия между начальной (AREDS1) и развитыми стадиями ВМД (AREDS2 и AREDS3) не выявлено. Вместе с тем, индивидуальный анализ показал, что наиболее частое повышение содержания дубль-позитивных Т-лимфоцитов (в 78% случаев) отмечалось в группе AREDS3 по сравнению с контролем.
Выводы. Повышение абсолютного и относительного количества CD3+CD4+CD8+ лимфоцитов и высокая частота случаев выявления дубль–позитивных Т-клеток в крови пациентов с начальной и промежуточной стадиями ВМД (максимальная в группе AREDS3; 78%) и здоровых лиц старшего возраста, позволяют думать о возможной роли этой субпопуляции в системных нарушениях иммунитета при данной офтальмопатологии. Полученные данные представляются важными для расшифровки предпосылок развития и разработки критериев прогнозирования ВМД.