Методические рекомендации к практическим занятиям для студентов ИГМУ по теме: «Физиология микроорганизмов»
1 МИНЗДРАВСОЦРАЗВИТИЯ РОССИИ Государственное образовательное учреждение Высшего профессионального образования ИРКУТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ (ГОУ ВПО ИГМУ Минздравсоцразвития России) Медико-профилактический факультет Кафедра микробиологии Методические рекомендации к практическим занятиям для студентов ИГМУ по теме: «Физиология микроорганизмов» для специальности: «Фармация» 2009г. 1
2 Методические рекомендации составлены: зав. кафедрой микробиологии ИГМУ проф. Р.В. Кибортом, ассистентом кафедры Л.А. Годяевой Методические рекомендации составлены в соответствии с типовым учебным планом общеобразовательного стандарта подготовки студентов высших медицинских учебных заведений и медицинских факультетов университетов по курсу "Микробиология с вирусологией и иммунологией" и рабочей программой кафедры микробиологии ИГМУ. Методические рекомендации обсуждены на заседании кафедры микробиологии ИГМУ. Протокол от 2009г. Методические рекомендации рассмотрены и рекомендованы к изданию на заседании цикловой методической комиссии кафедр медикобиологического профиля ИГМУ. Протокол от 2009 г. Председатель ЦМК профессор Р.В. Киборт 2
3 ЗАНЯТИЕ 1 Тема занятия: Физиология микроорганизмов: питание, питательные среды, используемые для культивирования микроорганизмов (классификация, требования). Культуральные свойства микроорганизмов. Дыхание, рост и размножение бактерий. Принципы культивирования аэробных и анаэробных микроорганизмов. Вопросы для самостоятельной подготовки студентов к занятиям: 1. Химический состав бактериальной клетки. Роль воды, белков, липидов, углеводов, нуклеиновых кислот, минеральных солей для жизнедеятельности бактерий. 2. Питание бактерий. Типы питания. Механизмы переноса питательных веществ в бактериальную клетку. 3. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения бактерий в популяции. 4. Дыхание бактерий. Основные типы биологического окисления субстрата бактериями. 5. Энергетический метаболизм. Аэробы, анаэробы, факультативные анаэробы, микроаэрофилы. 6. Аэротолерантные системы защиты бактериальной клетки от токсического действия свободных кислородных радикалов. 7. Пути получения энергии: биологическое окисление и брожение. Студент должен знать: 1. Культивирование микроорганизмов. Условия, необходимые для культивирования: питательные среды, температурный режим, состояние кислорода в атмосферном воздухе. 2. Питательные среды. Классификация питательных сред. 3. Требования, предъявляемые к питательным средам. 4. Практическое применение питательных сред. 5. Культуральные свойства бактерий. 6. Методы культивирования бактерий на жидких и твердых питательных средах. 7. Знать способы создания анаэробных условий. 8. Знать методы выделения чистых культур на основе: а) механического разобщения; б) биологических особенностей микроорганизмов; в) биохимических особенностей микроорганизмов. Студент должен уметь: 1. Соблюдать правила противоэпидемического режима и техники безопасности при работе с чистыми культурами возбудителей. 2. Забирать материал для проведения бактериологических исследований. 3. Проводить бактериологическую работу: - дифференцировать типы роста микроорганизмов на жидких питательных средах; - описывать культуральные свойства микроорганизмов на твердых питательных средах. - изучать культуральные свойства бактерий. - производить посев для выделения чистой культуры анаэробов. 3
4 ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ НА ЗАНЯТИИ ЗАДАНИЕ 1. Разберите типы питательных сред, их классификацию и пригодность для применения в бактериологической практике, используя рисунок 1 и таблицу 1. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Критерии пригодности питательных сред Состав МИКРООРГАНИЗМОВ Питательные среды КЛАССИФИКАЦИЯ По консистенции Сбалансированность питательных веществ 1. Плотные 2. Полужидкие 3. Жидкие рн Влажность Стерильность Температура 1. Белковые 2. Безбелковые 3. Минеральные По происхождению 1. Искусственные 2. Естественные а) животные б) растительные По назначению Рис Среды консервирования; 2. Среды обогащения микробных культур; 3. Среды для культивирования микроорганизмов; 4. Среды для выделения и накопления культур микроорганизмов; 5. Среды для идентификации микроорганизмов; 4
5 ХАРАКТЕРИСТИКА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД Питательные среды Жидкие Плотные Основные Мясо-пептонный бульон (МПБ) Мясо-пептонный агар (МПА) Таблица 1 Специальные: а) Сложные сахарный МПБ; сывороточный МПБ; асцитический МПБ б) Элективные, избирательные, селективные (растет определенный вид микроорганизмов, химические компоненты среды ингибируют рост других микробов в) Среды обогащения (используются для увеличения концентрации микрорганизмов в исследуемом материале г) Дифференциальнодиагностические среды (для выделения определенных видов микроорганизмов) д) Синтетические (специальные) 1% щелочная пептонная вода; 10% желчный бульон Китта-Тароцци; сахарный МПБ среды Гисса полужидкие сахара сахарный МПА; кровяной МПА желточно-солевой агар среда ЭНДО; среда Левина; среда Олькеницкого среда Сотона ТРЕБОВАНИЯ, ПРЕДЪЯВЛЯЕМЫЕ К ПИТАТЕЛЬНЫМ СРЕДАМ: Питательные среды должны: а) состав (содержать вещества необходимые для роста и размножения микроорганизмов (органические и неорганические вещества, витамины, микроэлементы); б) быть стерильными; в) иметь определенную для каждого вида микроорганизмов рн среды; г) быть прозрачными; д) иметь определенную влажность. ЗАДАНИЕ 2. Используя Рис.2 разберите методы выделения чистых культур микроорганизмов. 5
6 МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР МИКРООРГАНИЗМОВ В основе лежит механическое разобщение микробных клеток на плотных питательных средах Рассев по поверхности Рассев в глубине Метод штриха Метод Дригальского Метод Коха и его модификации Ускорить процесс выделения чистой культуры можно на основе биологических особенностей микроорганизмов По Шушкевичу Структурные компоненты микрооргани змов Применение элективных сред Метаболические особенности микроорганизмов Различная устойчивость к антибиотикам, анилиновым красителям и др. химическим веществам, температуре Рис. 2 Аэробноанаэробный симбиоз Различия в процессах дыхания ЗАДАНИЕ 3 Разобрать методы выделения чистой культуры на основе механического разобщения, используя рисунок 3-4. Метод выделения чистой культуры микроорганизмов путем рассева на поверхности плотной питательной среды. 6
7 Метод посева истощающим штрихом. В основе метода лежит механическое разобщение микробных клеток путем снижения их концентрации по ходу нанесения исследуемого материала бактериологической петлей штриховыми а) По ходу посева Исследуемый материал движениями по поверхности плотной питательной среды (а) и последующим их культивированием с целью получения изолированных колоний (б). Метод Дригальского В основе этого метода лежит разобщение микробных клеток на поверхности питательной среды с применением шпателя. На поверхность питательного агара наносится капля исследуемого материала и распределяется круговыми движениями шпателя по всей поверхности,(крышка на чашке должна быть слегка приоткрыта). Не прожигая шпателя, посев производится аналогичным образом во 2-ю и затем в 3-ю чашку последовательно. Чашки подписываются и инкубируются при t - 37 С. Метод выделения чистой культуры микроорганизмов путем рассева в глубине плотной питательной среды. Суть метода состоит в снижении концентрации микроорганизмов в исследуемом материале путем разведения в физиологическом растворе хлорида натрия (а) с последующем внесении в питательный агар (б) и культивированием с целью получения изолированных колоний (в). 7
8 а) б) Исследуемый ммптериал материал Физиологический раствор МПА t -45 С МПА t -45 С МПА t -45 С МПА t -45 С МПА t -45 С МПА t -45 С в) Инкубирование при t - 37 C Рис.4 8
9 Чистую культуру микроорганизмов выделяют на основе культуральных свойств на твердой питательной среде. На поверхности питательной среды формируют колонии те микроорганизмы, которые имеют аэробный тип дыхания. Факультативные аэробы и анаэробы формируют колонии в толще агара. Метод выделения чистых культур на основе биологических особенностей микроорганизмов а) Метод Шукевича. Этот метод используется для выделения чистой культуры тех микроорганизмов, для которых характерен ползучий рост. Посев исследуемого материала производится в конденсат скошенной части агара. Для этого стерильной петлей исследуемый материал вносится так, чтобы не соприкасаться с поверхностью питательной среды. Пробку с питательной средой инкубируют в вертикальном положении. б) Выделение чистой культуры с использованием селективных сред В основе этого метода лежат метаболические особенности микроорганизмов. Наличие ингибиторов роста в питательной среде не позволяет формировать колонии микроорганизмов сопутствующей микрофлоры. Специальные среды нашли широкое применение для выделения возбудителей различных инфекций. Добавление к питательной среде значительных концентраций поваренной соли (ЖСА) дает селективные преимущества росту стафилококка, ингибирует сопутствующую микрофлору. При выделении чистой культуры некоторых бактерий используют для их культивирования температурный оптимум. Культивированием при t ниже 20 С позволяет выделить из загрязненного материала возбудителя чумы, рост сопутствующей микрофлоры ингибируется. ЗАДАНИЕ 4. Освоить посев штрихом на плотную питательную среду с целью получения изолированных колоний: а) правой рукой взять бактериальную петлю и простерилизовать ее над пламенем горелки; б) левой рукой, между большим и указательным пальцами держать пробирку с исследуемым материалом; в) легким вращательным движением обхватить ватную пробку мизинцем правой руки, прижимая к ладони и вынуть ее из пробирки; г) край пробирки слегка обжечь; д) стерильной петлей забрать немного материала, содержащего микробы и зигзагообразными движениями нанести на поверхность питательного агара чашки Петри; е) петлю после посева прожечь, пробирку закрыть пробкой. Следите, чтобы посев был выполнен на всю поверхность питательной среды, не нарушая ее целостности. 9
10 ЗАДАНИЕ 5. Освоить метод посева уколом в столбик агара. а) пробирку с агаром держать дном кверху. б) материал, подлежащий посеву берут стерильной иглой, которую отвесно вкалывают в поверхность агара и продвигают по оси пробирки до самого дна; в) иглу извлечь, обжечь над пламенем горелки, пробирку закрыть пробкой и поставить в термостат. ЗАДАНИЕ 9. Освоить метод посева на питательную среду шпателем. а) чашку слегка приоткрыть. На поверхность агара нанести стерильной бактериальной петлей каплю исследуемого материала; б) стерильным стеклянным шпателем растереть каплю по всей поверхности, проводя легкие вращающие движения шпателем; в) по окончании работы шпатель дезинфицировать путем прожигания над пламенем горелки, предварительно обработав спиртом, либо опустив его в дезинфицирующий раствор. 10
11 ЗАНЯТИЕ 2 Тема занятия: ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АЭРОБНЫХ АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ (I ДЕНЬ). (II ДЕНЬ) И Вопросы для самостоятельной подготовки студентов к занятиям: 1. Дыхание бактерий. Основные типы биологического окисления субстрата бактериями. 2. Энергетический метаболизм. Аэробы, анаэробы, факультативные анаэробы, микроаэрофилы. 3. Аэротолерантные системы защиты бактериальной клетки от токсического действия свободных кислородных радикалов. 4. Пути получения энергии: биологическое окисление и брожение. Студент должен знать: 1. Методы культивирования бактерий на жидких и твердых питательных средах. 2. Знать способы создания анаэробных условий. 3. Знать методы выделения чистых культур на основе: а) механического разобщения; б) биологических особенностей микроорганизмов; в) биохимических особенностей микроорганизмов. Студент должен уметь: 1. Изучить культуральные свойства бактерий. 2. Производить посев культуры для выделения чистой культуры анаэробов. 11
12 ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ НА ЗАНЯТИИ В клинической практике Для диагностики инфекционных заболеваний КУЛЬТУРАЛЬНЫЙ МЕТОД В эпидемиологии Для определения микробоносите льства Для выявления источника инфекции Примечание: культуральный метод принято называть: В санитарной микробиологии Для определения патогенных микроорганизм ов во внешней среде а) бактериологическим в случае выделения и идентификации бактерий; б) микологическим в случае выделение и идентификации грибов; в) вирусологическим в случае выделения и идентификации вирусов. I ЭТАП (рис 1) ЭТАПЫ КУЛЬТУРАЛЬНОГО МЕТОДА В случае если исследуемый материал больного в норме, стерильный или содержит низкую концентрацию микроорганизмов, то его засевают на среду обогащения. Определение микробного состояния объектов внешней среды Посев исследуемого материала на плотные питательные среды с целью выделения чистой культуры микроорганизма II ЭТАП (рис 2) Накопление чистой культуры Необходимо: 1) по культуральным свойствам дифференцировать микроорганизм и выбрать колонию для накопления в зависимости от цели исследования; 2) определить чистоту культуры, используя морфологию микробной клетки по тинкториальным свойствам; 3) в случае если культура чистая, то проводится на скошенный питательный агар. III ЭТАП (рис. 3) IV ЭТАП (рис. 4) Идентификация проводится для определения принадлежности культуры к виду, используя для этих целей набор идентификационных тестов. Учет результатов, заключение о виде выделенного микроорганизма. 12
13 Рис. 1. Исследуемый материал Среда обогащения Твердый питательный агар Рис. 2. А Методом штриха Накопление чистой культуры Рис. 3 Мазок, окраска по Граму Постановка идентификационных тестов (определение чистоты культуры) Рис. 4 идентификация культуры Рис. 5 13
14 ЗАДАНИЕ 1. Изучить культуральные свойства бактерий при росте на жидких питательных средах, используя рисунок 5. ЗАДАНИЕ 2. Определить характер роста микробных культур на жидких питательных средах и зарисовать в тетрадь (рисунок 6). в виде пленки диффузное помутнение придонный осадок Рис. 6 ЗАДАНИЕ 3. Изучить культуральные свойства бактерий при росте на плотных питательных средах, используя таблицу 2 и рисунки 7 и 8. СВОЙСТВА МИКРОБНЫХ S- И R-КОЛОНИЙ Таблица 2 S-тип Колонии гладкие, правильные, выпуклые. Клетки нормальной морфологии. У подвижных видов есть жгутики, у капсульных видов хорошо выражены капсулы. Биохимически более активен. В антигенном отношении полноценен. У патогенных видов вирулентность выражена. R-тип Колонии шероховатые, неровные, уплощенные. Короткие и кокковидные формы. У подвижных видов при некоторых условиях жгутики могут отсутствовать; капсулы отсутствуют. Биохимически менее активен. В антигенном отношении неполноценен. Вирулентность выражена слабо или не выражена. 14
15 ТИПЫ КОЛОНИЙ МИКРООРГАНИЗМОВ ФОРМИРУЮЩИЕСЯ НА ПЛОТНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ Колонии различают по: Величине: - крупные (4-5 мм) - средние (2-4 мм) - малые (1-2 мм) - точечные Форме: - круглые - правильные - неправильные Цвету: - бесцветные - пигментированные (белые, желтые, оранжевые, золотистые и др.) Консистенции: - сухие - влажные - слизистые - плотные - мягкие Внутренней структуре: - зернистая - гомогенная - неоднородная Поверхность колонии: - плоская - выпуклая - гладкая - морщинистая - исчерченная - складчатая - блестящая Край колонии: - ровный - волнистый - бахромчатый - фестончатый - зазубренный ЗАДАНИЕ 4. Описать характер роста микробной культуры на плотных питательных средах разного назначения а) РОСТ РАЗНЫХКУЛЬТУР МИКРООРГАНИЗМОВ НА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ МПА культура Staphylococcus aureus культура E. coli 15
16 б) РОСТ СМЕСИ МИКРОБНЫХ КУЛЬТУР НА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ МПА А Б Колония культуры А отличается от колонии культуры Б по: свойствам в) РОСТ КОЛОНИЙ E. coli НА РАЗНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ (ЭНДО И МПА) ЗАДАНИЕ 5. Описать культуральные свойства колонии, выросшей на МПА, результаты внести в таблицу 3. Таблица 3 КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА КОЛОНИИ, ВЫРОСШЕЙ НА МПА Признаки колонии 1. Форма 2. Величина 3. Цвет 4. Характер поверхности 5. Характер краев 6. Степень прозрачности 7. Консистенция 8. Структура (при малом увеличении микроскопа) Культуральные свойства 16
17 Заключение: R или S формы колонии ЗАДАНИЕ 6. Разобрать способы создания анаэробных условия, используя рис. 9. Способы создания анаэробных условий Физико-механические: 1. посев в высокий столбик сахарного агара; 2. посев по Перетцу; 3. посев по Вейон- Виньялю; 4. выращивание под слоем вазелинового масла; 5. Использование анаэростатов; 6. Применение аппарате КиПа Химические: Добавление химических поглотителей кислорода: 7. в питательные среды - глюкоза; 8. в эксикаторы - щелочной раствор пирогаллола; 9. использование прибора Арисовского Биологические: Аэробно-анаэробный симбиоз - метод Фортнера Рис. 9 По способу дыхания микроорганизмы делятся на аэробы и анаэробы. Аэробам необходим для дыхания свободный кислород. Для культивирования анаэробов следует создавать сниженное парциальное давление кислорода в среде. Анаэробные условия можно создать, используя физико-механические, химические и биологические методы. ЗАДАНИЕ 7. Провести посев исследуемого материала, взятого от больного с подозрением на анаэробную газовую гангрену на среды накопления (среду Китта-Тароцци). 17
18 ЗАНЯТИЕ 3 Тема: МЕТАБОЛИЗМ БАКТЕРИЙ. ФЕРМЕНТЫ. СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Вопросы для самостоятельной подготовки студентов: 1. Особенности метаболизма бактерий. 2. Ферменты бактерий. Принципы их классификации. 3. Ферменты как фактор патогенности. Студент должен знать: 1. Культуральный метод исследования. Сущность и идентификационные тесты используемые в культуральном методе. 2. Ферменты бактерий, их практическое применение. Студент должен уметь: 1. Проводить посев культур микроорганизмов на среду Гисса для определения биохимических свойств. 2. Учитывать биохимические свойства выделенных культур микроорганизмов (сахаролитические, протеолитические). 3. Проводить идентификацию чистой культуры микроорганизмов на основе комплекса идентификационных тестов. 18
19 ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ НА ЗАНЯТИИ Задание 1. Проверить выделенную культуру аэробных бактерий на скошенном МПА на чистоту (мазок, окраска по Граму), изучая морфологические и тинкториальные свойства выделенной культуры. Задание 2. Провести посев выделенной чистой культуры со скошенного МПА на среды Гисса для определения биохимических свойств (сахаралитических и протеолитических). Задание 3. Изучить идентификационные тесты, используемые в культуральном методе для определения вида возбудителя используя рис.10. Свойства микроорганизмов, используемые для идентификации в культуральном методе морфологические форма микробной клетки тинкториальные отношение к красителям к окраске по Граму к окраске по Циль - Нисьсену к окраске по Рамановскому - Гимзе культуральные Характер роста на жидких и плотных питательных биохимические Способность деструкции субстрата при наличии ферментов Учет конечных продуктов ферментации (по выделившейся кислоте, газу) антигенные Использован ие серологическ их реакций для определения специфическ их антигенов микробной выделение биологически активных Сероидентификация Определен ие форм с патогенны ми свойствам и среди микробной популяции фаголизабельность Разрушени е микробной клетки специфиче ским фагом Рис. 10 Сахаролитические ферменты Под действием сахаролитических ферментов бактерий расщепляют углеводы и высокоатомные спирты до альдегидов и кислоты. Конечными продуктами их расщепления являются газообразные вещества: углекислый газ и водород. Отношение микроорганизмов к различным углеводам специфично и поэтому они используются в бактериологической практике для дифференциации различных видов бактерий. Для обнаружения сахаролитических ферментов исследуемую культуру засевают в питательную среду Гисса, которая также называется «пестрый ряд». «Пестрый ряд» 19
20 представляет собой ряд пробирок с пептонной водой, каким-либо сахаром. «Пестрый ряд» Гисса содержит глюкозу, маннит, лактозу, мальтозу, сахарозу. В отдельных случаях его дополняют дульцитом, сорбитом, ксилитом, арабинозой. «Пестрый ряд» получил свое название за то, что под действием ферментов растущего микроорганизма, одни углеводы остаются неизменными (отсутствие ферментов) и следовательно, цвет питательной среды не изменяется. В то время как другие сахара расщепляются, образуя кислые продукты распада, которые изменяют цвет индикатора и следовательно цвет питательной среды. Среда Гисса бывает жидкой и полужидкой. В пробирку с жидкой средой Гисса для обнаружения газа опускают «поплавок», который представляет собой маленькую трубочку, запаянную с одного конца. При стерилизации питательных сред он заполняется. При образовании в среде газообразных продуктов часть питательной среды вытесняется,вследствие чего в запаянной верхушке поплавка образуется воздух, пузырек различной величины. При изучении сахаралитических ферментов, выделяемых микроорганизмами учитывается не только явление расщепления сахаров по кислотообразованию, но глубина ферментативного процесса по количеству в питательной среде газообразующих продуктов расщепления. Протеолитические ферменты Протеолитические ферменты бактерий определяется по наличию продуктов деструкции белка. Протеолитическая активность одного и того же микроорганизма культивации на разных средах питательных средах проявляется неодинаково, что обусловлено специфичностью ферментов. Чаще всего для этой цели в качестве белкового субстрата применяют желатин, свернутую лошадиную сыворотку, молоко. Некоторые виды микроорганизмов с выраженной протеолитической активностью обладают способностью расщеплять белок и пептон до продуктов глубокого распада: индола, сероводорода, мочевины, аммиака. При определении видов наибольшее значении имеет выявление индола и сероводорода. Образование H 2 S и индола в микробной культуре определяют одновременно. Для выявления протеолиза ферментов используемую культуру засевают в питательную среду, содержащую тот или иной белок. Определение индола Определение индола в культуре микроорганизмов по Морелю. Индол определятся из сложной гетероцикличной кислоты тириптофана. Для выявления индолобразующих их культуры микроорганизмов необходимо исследуемую культуру микроорганизмов засевают петлей в МПБ, приготовленный особым способом и содержащий большое количество свободного триптофана. После посева под пробку вставляют индикационную бумажку, пропитанную раствором щавелевой кислоты (следить, чтобы она не 20
21 упала в питательную среду и не касалась её поверхности) посевы инкубируют в термостате до 48 часов при температуре 48 С. Учет результатов Образование индола сопровождается окрашиванием нижнего конца индикаторной бумаги в слабо розовый цвет. Определение сероводорода Сероводород является конечным продуктом расщепления серосодержащих аминокислот (цистеин, цистин, метионин) для определения H 2 S исследуемую культуру микроорганизмов засевают в МПБ. После посева под пробку вносятся индикаторная бумага, пропитанная уксуснокислым свинцом. Учет результатов В случае если культура при росте на МПБ выделяет H 2 S, которая вступает в соединение с уксуснокислым свинцом, в результате чего образуется сернокислый свинец. При этом бесцветная индикаторная бумага на H 2 S окрашивается в черно-бурый цвет. Дополнительные биохимические признаки, используемые при определении вида, выделенных микроорганизмов. Тест на каталазную активность. Фермент каталаза разлагает перекись водорода и вызывает образование атомарного кислорода (пузыри в среде). Используется для: дифференциации микроорганизмов. Стрептококки - не обладают каталазной активностью, стафилококки- обладают. Тест на оксидазную активность. Оксидаза окисляет фенилендиамин, что приводит к появлению синего окрашивания (для выявления оксидазоположительных бактерий, например, вибрионов или нейссерий). Уреазный тест. Уреазо (+) бактерии разлагают мочевину с образованием аммония, что приводит к красному окрашиванию среды, содержащей феноловый красный (используется для дифференциации протеев (+) от других энтеробактерий). Тест на коагулазную активность. Фермент вызывает коагуляцию плазмы крови (для дифференциации коагулазо(+) и коагулазо(-) стафилококков). Тест на ДНК-азную активность. ДНК-аза гидролизует ДНК, не гидролизованная ДНК осаждается соляной кислотой (для дифференциацииднк-аза(+) и ДНК-аза(-) стафилококков. 21